纽莫C0分别为同分异构体

纽莫康定B₀(Pneumocandin B₀)是高压棘白菌素类化合物，其半合成衍生物卡泊芬净(Caspofungin)已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗无效或无法耐受其他抗真菌药的制备中试患者的侵袭性曲霉病。作为合成真菌药物卡泊芬净的纽莫中间体，纽莫康定B₀由真菌Zalerion arboricola发酵产生，康定发酵过程中会产生与纽莫康定B₀结构相近的研究副产物及大量的色素。按照结构中脯氨酸上取代基的高压不同主要分为A₀，B₀和C₀，制备中试其中B₀，纽莫C₀分别为同分异构体。康定由于C₀为B₀生产过程中的研究关键杂质，在生产纯化过程中去除C₀有一定的高压难度。因此，制备中试开发出一种有效的纽莫方法得到高纯度的纽莫康定B₀对于后续合成卡泊芬净尤为重要。

色谱分离法在化合物的康定分离中应用较为广泛，且色谱纯度、研究回收率和分离效率等方面远远优于传统的制备方法，其中色谱纯度通过面积归一化法得到。相比于中低压色谱制备，高压色谱制备效率高、柱效高。笔者以实验室制得的纽莫康定B₀粗品为原料，通过高压制备对纽莫康定B₀进行了放大中试研究，开发出了一种生产周期短、成本低和色谱纯度高的制备工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

U3000高效液相色谱仪，赛默飞Thermo公司；Cs-prep150工业制备色谱系统，汉邦科技；R-1001N型旋转蒸发仪，郑州长城科工贸有限公司；SHB-B95型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；DHJK-2020低温冷却循环泵，郑州科泰实验设备有限公司；SCIENTZ-12ND冷冻干燥机，宁波新芝生物科技股份有限公司。

1.2 试 药

工业级二氯甲烷，山东金岭化工股份有限公司；工业甲醇，兖矿国宏化工有限责任公司；改性硅胶，苏州纳微科技股份有限公司；纽莫康定B₀粗品，鲁南新时代生物技术有限公司提供，质量分数81.20%;纽莫康定B₀对照品，大同市矿区风华生物科技有限公司，质量分数95.56%，批号16001;纽莫康定C₀对照品，大同市矿区风华生物科技有限公司赠与，质量分数95.11%，批号16002;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 实 验

2.1 HPLC(高效液相色谱)法测定B₀

纽莫康定B₀检测方法：Thermo Hypersil GOLD C18，4.6 mm×250 mm， 5 μm; 以V(乙腈)∶V(水)=45∶55为流动相，等度洗脱；检测波长210 nm， 柱温40 ℃，进样量10 μL，流量1 mL/min， 运行时间45 min。以纽莫康定B₀对照品进行外标法定量。纽莫康定B₀对照品溶液的配制：取纽莫康定B₀对照品约20 mg， 精密称定，置于50 mL容量瓶中，加乙醇超声溶解后，稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为400 mg/L的纽莫康定B₀对照品溶液。供试品溶液配制：对制备液用氮气吹干，加乙醇振摇使溶解并稀释至质量浓度约1 000 mg/L，摇匀，用0.22 μm有机滤头过滤。纽莫康定B₀的结构式为

2.2 HPLC(高效液相色谱)法测定C₀

检测方法为公司自行开发，线性梯度洗脱程序如表1所示。Welch Ultimate HILIC Amide柱，4.6 mm×250 mm， 3.5 μm; 波长220 nm， 流量1.0 mL/min， 进样量10 μL，柱温40 ℃，流动相A为水，流动相B为乙腈。

以纽莫康定C₀对照品进行外标法定量，纽莫康定C₀对照品溶液的配制与纽莫康定B₀对照品溶液的配制相同。纽莫康定C₀的结构式为

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